血液氧化应激活性氧光泽精化学发光法定量检测试剂盒产品说明...

 血液氧化应激活性氧光泽精化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

 血液氧化应激活性氧（ROS）光泽精化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过使用自由基探针光泽精，捕获体液中的活性氧族，使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测样品中活性氧族（超氧自由基阴离子）的生成和数量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体血液样品包括血浆、血清等活性氧族的检测。 产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。光泽精（lucigenin），又称硝酸双-N-甲基吖啶翁（bis-N-methylacridinium nitrate），是一种带正电荷的发光剂，单价还原后生成光泽精自由基，再与超氧自由基阴离子反应生成不稳定的中间物光泽精二恶二酮，由此分解成电激发状态（N－甲基丫啶酮），通过释放光子，回复到基态。光泽精作为探针，可以特异性检测体液中超氧自由基阴离子，其发光强度与超氧自由基阴离子水平成正相关。 

产品内容

 清理液（Reagent A）      20毫升

 发光液（Reagent B）       1毫升

产品说明书   1份

保存方式

保存 发光液（Reagent B） 在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

抗凝管：用于血液采集的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于样品操作

测试管或黑色96孔板：用于发光检测用的容器

化学发光仪：用于检测化学发光

实验步骤

• 样品预处理

选择一：血浆样品

• 准备好抗凝管
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
• （选择步骤）放进－70℃冰箱里保存
• 放进37℃培养箱里备用（1小时内）

选择二：血清样品

• 准备好不含抗凝剂的储存管
• 抽取1毫升血液，置于储存管里
• 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
• 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
• （选择步骤）放进－70℃冰箱里保存
• 放进37℃培养箱里备用（1小时内）

• 测读

测读开始前，打开化学发光仪，设定仪器内温度为37℃预热和整合测读10秒或15分钟；然后关掉实验室的灯光。将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。

• 准备好测试管，做好标记：阴性对照、样品本底和样品活性
• 移取400微升 清理液（Reagent A）到阴性对照测试管
• 移取400微升上述预处理的血液样品到样品本底测试管
• 移取400微升上述预处理的血液样品液到样品活性测试管
• 分别加入10微升 发光液（Reagent B）到上述测试管，除样品本底测试管
• 轻轻涡旋混匀
• 即刻放进37℃化学发光仪里测读
• 整合测读10秒，获得相对发光单位（relative light unit；RLU）
• 或者整合测读15分钟，获得光电子读数：X 10⁶ CPM（counted photon per minute）（注意：可以使用液体闪烁仪替代）
• 计算ROS水平：

（样品活性－样品本底） ÷ 0.4（毫升；样品容量） ＝相对发光单位（RLU） / 毫升＝相对发光单位（RLU）/【（N）X 10⁶ 细胞】＝X 10⁶ CPM/毫升＝X 10⁶ CPM/【（N）X 10⁶ 细胞】

注意事项

• 本产品为50次操作
• 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化
• 操作时，须戴手套
• 测试前，血液样品须新鲜收集，1小时内为*
• 样品制备后即刻测读，不宜过夜保存
• 必要时，例如活性氧族过低，可以浓缩样品处理
• 测读的所有步骤均须在暗室里进行
• 如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射（injector）管道
• 本公司提供系列活性氧分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感