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如何正确使用白介素6(IL-6)ELISA试剂盒?

更新时间:2020-03-17 点击次数:1252
   如何正确使用白介素6(IL-6)ELISA试剂盒?
  白介素6(IL-6)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠白介素6(IL-6)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
  操作步骤
  1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
  4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
  白介素6(IL-6)ELISA试剂盒说明书操作注意事项:
  1.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
  2.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
  3.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
  4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  5.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
  6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
  7.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
  8.按照试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
  9.白介素6(IL-6)ELISA试剂盒底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

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