真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE)红色荧光
流式细胞分析试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE)红色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定真菌/酵母细胞中DNA结合碘化丙啶染料程度,来定量DNA含量,以进一步获取细胞周期分布状况的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母细胞,包括芽殖酵母、裂殖酵母等的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌,即到即用,分辨率高,操作简捷,性能稳定。
技术背景
芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母(Schizosacchromyces pombe)是研究真核生物细胞周期的模式生物。细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料,借助细胞流式仪,测定出DNA含量,根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化,来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术(FLOW CYTOMETRY)是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰(sub-G1)细胞群。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
固着液(Reagent B) 毫升
抗干扰液(Reagent C) 毫升
酶解液(Reagent D) 毫升
染色液(Reagent E) 毫升
产品说明书 1份
保存方法
保存 抗干扰液(Reagent C)、 酶解液(Reagent D)和 染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里; 染色液(Reagent E)避免光照,有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
2毫升离心管:用于细胞染色的容器
(微型)台式离心机:用于样品操作操作
培养箱或恒温水槽:用于反应孵育
细胞流式仪:用于细胞荧光分析
实验步骤
- 准备好5 X 106的待测真菌/酵母细胞
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入xx毫升 清理液(Reagent A)到15毫升锥形离心管,混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 缓慢加入xx毫升预冷的 固着液(Reagent B),且涡旋震荡混匀
- 放进4℃冰箱里孵育16小时
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
- 小心抽去固着液
- 加入xx毫升 清理液(Reagent A)到15毫升锥形离心管,混匀
- 移入到2毫升离心管
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
- 重复清洗一次
- 加入xx微升 抗干扰液(Reagent C),混匀
- 放进37℃恒温水槽,孵育2至16小时
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
- 加入xx微升 酶解液(Reagent D),混匀
- 放进37℃恒温水槽,孵育20分钟
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
- 加入xx微升 清理液(Reagent A),混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入xx微升 染色液(Reagent D),混匀细胞颗粒群
- 超声处理100瓦,30%功率,15秒
- 在暗室里37℃培养箱里孵育30分钟
- 移入到细胞流式仪测试管(可放进4℃冰箱里待测)
- 即刻进行细胞流式仪分析:波长488nm氩离子激光出现红色荧光(或488nm激发波长,610nm散发波长),观察50000个细胞以上
注意事项
- 本产品为50次操作
- 操作时,须戴手套
- 孵育时,必须避免光照
- 建议细胞染色完成后,即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测,不要超过1周
- 细胞流式仪分析前,须混匀内容物,或超声处理,避免细胞成团
- 细胞检测量不得少于10000个
- 告知流式仪技术员有关细胞类型
- 使用未经染色的细胞进行FSC与SSC设定,然后将染色细胞调整到未经染色细胞的水平,包括FL1、FL2、FL3的PMT
- 建议设定:
Detector FSC E00 Gain:3
Detector FL2-A Voltage:890 Gain:2
流速:500/秒
质量标准