活体细胞氧化应激活性氧超氧阴离子原位染色试剂盒产品说明书（中文版）

MB10067.1 v.A

   活体细胞氧化应激活性氧超氧阴离子原位染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

   活体细胞氧化应激活性氧超氧阴离子原位染色试剂是一种旨在通过硝基蓝四氮唑染料，受到超氧阴离子O₂^-的还原，产生不溶性蓝黑*素沉淀，来定性检测细胞内活性氧族的生成和增加的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。染料四氮唑兰（tetrazolium）化合物，包括硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧阴离子O₂^-的直接还原，便产生不溶性甲暨色素。据此证明细胞内超氧阴离子活性氧族的存在。 

产品内容

   染色液（Reagent A）     毫升

   清理液（Reagent B）     毫升

产品说明书     1份

保存方式

保存   染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

*细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基

细胞培养箱：用于细胞染色孵育

光学显微镜：用于观察染色细胞

实验步骤

• 准备好待测的细胞培养板的培养细胞
• 直至细胞铺满率达70％
• 小心抽掉多孔细胞培养板里的培养液
• 小心加入适量的用户自备的细胞培养液以及处理药品到每个培养孔里（见下表）

• 加入适量的   染色液（Reagent A）到每个培养孔里（见下表）

• 轻轻摇动细胞培养板，混匀
• 放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟
• 小心抽去培养液
• 小心加入适量的   清理液（Reagent B）（见下表）

• 小心抽去清理液
• 重复实验步骤9和10二次
• 小心加入适量的   清理液（Reagent B）（见上表）
• 即刻置于光学显微镜下观察：细胞呈现蓝黑色，显示ROS增强
• （选择步骤）倒置培养板在纸巾上，使其吸干培养孔里的残存液体
• （选择步骤）用封口膜密封培养板，在室温下长时间保存
• （选择步骤）如果重新启封观察，发现样本干枯或收缩，只需加上适量的无离子水则可

注意事项

• 本产品为100次（96孔板）操作
• 细胞培养操作，须无菌状态下进行
• 操作时，须戴手套
• 孵育时，须避免光照
• 建议96孔细胞培养板中每孔待测细胞密度为10⁴细胞
• 细胞染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将细胞冲洗掉
• 本产品适合载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿等操作，按照6孔细胞培养板用量操作
• 如果超氧阴离子活性氧浓度过低，可以延长孵育时间至4小时
• 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞观察分析
• 本公司提供系列细胞活性氧检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰