植物a-淀粉酶（a-AMYLASE）活性EPS-G7酶偶联比色法定量检测试剂盒
产品说明书（中文版）
主要用途
植物a-淀粉酶（a-AMYLASE）活性EPS-G7酶偶联比色法定量检测试剂是一种旨在底物4,6-亚乙基4-硝基苯-麦芽庚（七）糖苷，受到a-淀粉酶和α-糖苷酶偶联反应水解后释放出显色产物对硝基苯酚，即采用比色法测定其吸光峰值的升高变化，以此测定样品中a-淀粉酶活性的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种新鲜植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）等裂解萃取液样品a-淀粉酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
淀粉酶（AMYLASE）属于糖苷水解酶类（glycoside hydrolase）。淀粉酶通过水解方式，分解淀粉的α-1,4链接，释放出葡萄糖、麦芽糖（maltose）、麦芽三糖（maltotriose）、糊精（dextrin）等简单糖分子。淀粉酶分成三类：α-淀粉酶、β-淀粉酶和γ-淀粉酶。其中α淀粉酶（EC 3.2.1.1），又称为α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶（α-1,4-glucan 4-glucanohydrolase）或糖原酶（glycogenase），是钙离子依赖性钙金属蛋白酶（calcium metalloenzyme），分解淀粉为葡萄糖、麦芽糖（maltose）、麦芽三糖（maltotriose）、糊精（dextrin）等，为主要的消化酶，尤其在人体中，例如唾液和胰淀粉酶等。β淀粉酶（EC 3.2.1.2），又称为α-1,4-葡聚糖麦芽糖水解酶（1,4-α-D-glucan maltohydrolase）或糖基淀粉酶（saccharogen amylase），分解淀粉为葡萄糖等。植物、真菌、细菌等均能产生，而人体组织不含有。γ-淀粉酶（EC 3.2.1.2），又称为α-1,4-葡聚糖葡萄糖苷酶（Glucan 1,4-α-glucosidase）或溶酶体α-葡萄糖苷酶（lysosomal α-glucosidase），在酸性环境下分解淀粉为葡萄糖。淀粉是一种复杂分子，由多聚糖直链淀粉（amylose）和支链淀粉（amylopectin）构成。植物和细菌产生大多数淀粉。在淀粉酶的催化作用下，分解产生简单糖分子，作为能源储存，植物用于光合作用。植物和细菌性淀粉酶常用于工业，包括烘培食物和乳制品的制造，以及酒精和纸材的生产。基于底物4,6-亚乙基4-硝基苯-麦芽庚（七）糖苷（4,6-ethylidene(G7)-1[4-nitrophenyl(G1)]-1,4-a-D-maltoheptaoside
EPS-PNP-G7)），通过α-淀粉酶的水解，转化为亚乙基（ethylidene；EPS）和4-硝基苯-麦芽庚（七）糖苷（4-nitrophenyl(G1)]-1,4-a-D-maltoheptaoside；PNP-G7），进而在α-糖苷酶（α-glucosidase）的水解下，降解为葡萄糖和对硝基苯酚（4-nitrophenol），在分光光度仪（405nm波长）下测定，以定量分析α-淀粉酶的活性。其反应方式为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 毫升
底物液（Reagent E） 毫升
补充液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液（Reagent A）和 裂解液（Reagent B）在4℃冰箱里；其余的保存在-20℃冰箱里； 底物液（Reagent E），避免光照；有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品制备和反应操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
2.2毫升离心管：用于配制标准样品的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织
尼龙网（nylon mesh）：用于去除残渣
4℃（微型）台式离心机：用于样品处理
恒温培养箱：：用于反应物孵育
比色皿：用于比色测定的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
一、样品准备
- 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量
- （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
- （选择步骤）加入xx毫升 清理液（Reagent A）清洗1次
- 移入到一个液氮冻存管
- 即刻放进液氮罐过夜
- 次日从液氮罐里取出，即刻（*速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）
- 放进一个15毫升锥形离心管
- 加入预冷的xx毫升 裂解液（Reagent B）
- 涡旋震荡5秒，充分混匀
- 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
- 置于冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）
- 准备1个小型漏斗，内衬尼龙丝或150微米的尼龙网（nylon mesh），置于15毫升锥形离心管上
- 将所有组织匀浆物移入到小型漏斗里过滤
- （选择步骤）或者放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g
- 小心移取无渣液分装到预冷的1.5毫升离心管
- 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
- 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作（注意：后续操作须在2小时内完成）
二、测定准备
- 从-70℃取出待测样品（例如植物组织裂解悬液样品等），置于冰槽里
- 设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长为405nm，并置零
- 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度
- 移取xx微升 缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
- 加入xx微升 反应液（Reagent D）
- 加入xx微升 底物液（Reagent E）
- 上下倾倒数次，混匀
- 在37℃温度下，孵育3分钟
- 加入xx微升待测样品（注意：50微克总蛋白）或 补充液（Reagent F）
- 在37℃温度下，孵育5分钟
- 即刻放进分光光度仪检测：获得背景和样品吸光读数
- 测算样品酶活性：
注意事项
- 本产品为20次操作，包括背景对照测定
- 操作时，须戴手套
- 底物液（Reagent E）注意避光
- 样品检测前，须溶解和澄清
- 比色测定后，比色皿须清洗*
- 样品测定值高于背景测定值，表明有酶活性
- 建议待测样本蛋白浓度为50微克/50微升；如果样本酶活性过低，则可以增加样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1）
- 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
- a-淀粉酶活性单位浓度定义：在37℃室温下，pH 7.1的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）释放1微摩尔的对硝基苯酚
- 本公司提供系列淀粉酶学分析技术产品
质量标准
