每个进口ELISA试剂盒价格都不贵，但是如果使用不恰当的话，造成检测结果出差错还是不好的。所以在使用ELISA试剂盒检测的时候，步骤的准确性真的是相当重要的。以下先介绍一种简单的—间接法：1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤;
6.后一遍用DDW洗涤。
7.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。 8.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 9.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
注意事项
1.试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2．加样：加样时，要控制加样速度，避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性；一般加样时间控制在10分钟内，如果样本数量过多，可使用多道移液器。
3.孵育：样品要在密闭的容器内进行孵育，严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4.洗涤：洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，同时要消除板底残留的液体和手指痕迹，避免影响zui后的酶标仪读数。
5.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，10分钟左右），如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
6.建议实验前样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
7.建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。
