ATCC细胞的原理在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。
ATCC细胞的使用方法：
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或隔夜，以稳定细胞状态。然后，用75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，收集瓶内液体于50ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用6ml培养基重悬，全部接种到25cm2培养瓶中，再放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。如果离心后细胞量很多，可以直接1:2分瓶培养。
2、细胞传代：细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离5min，弃上清，用12ml培养基重悬细胞，按1:2的比例进行接种传代，接种到25cm2培养瓶中，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，2-3天更换培养液。换液的步骤同细胞NK-92细胞，ATCC细胞，培养技术传代步骤。
3、细胞冻存：
a、细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=5:4:1）重悬细胞，并放置于冻存管中。
b、先将细胞冻存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃隔夜，24h后可转入液氮中进行长期保存。
4、ATCC细胞复苏：
a、从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
b、将冻存管中的细胞移至含有5ml培养液的15ml离心管中，然后1000rpm/min，离心5min。
c、弃上清，沉淀细胞用6ml培养基重悬，接种到培养瓶中，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。
d、第二天，换用新鲜培养基继续培养。
