糖蛋白电泳高碘酸希尔法品红亚硫酸盐染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

糖蛋白电泳高碘酸希尔法品红亚硫酸盐染色试剂是一种旨在通过高碘酸氧化糖蛋白中的糖基为

乙醛，使用品红亚硫酸盐染料，产生品红色或紫红色，来识别蛋白电泳中样本糖蛋白的*而经典的技术

方法。该技术由大师级科学家精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种蛋白电泳分析中糖蛋

白成分检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1，2－glycol）中

的碳原子，成为乙醛基团（aldehyde group），与希尔试剂（Schiff’s Reagent），即品红亚硫酸盐染料（fuchsin

sulfite）发生反应，呈现品红色（magenda）或紫红色，表明糖蛋白阳性。在糖蛋白电泳上，使用高碘酸希

尔法品红亚硫酸盐染色技术，可以检测到 25 至 100 纳克的糖蛋白。

产品内容

固定液（Reagent A）

毫升

氧化液（Reagent B）

毫升

染色液（Reagent C）

毫升

还原液（Reagent D）

毫升

保存液（Reagent E）

毫升

产品说明书 1 份

保存方式

保存在 4℃冰箱里；染色液（Reagent C），严格密封瓶口，避免光照； 试剂具有腐蚀性，注意操

作安全；有效保证 6 月

用户自备

100 毫升烧杯：用于配制工作液的容器

塑料盘：用于染色的容器

无离子水：用于稀释试剂溶液

平式摇荡仪：用于染色操作时的孵育

实验步骤

实验开始前，完成 SDS-PAGE 蛋白电泳的运行，取出 6cm X 8cm 的胶体，作好定向标记，然后进行下列操

作：

11.

准备 5 个 100 毫升的烧杯，作好 1 至 5 号标记

2.

移取 xx 毫升 固着液（Reagent A）到 1 号烧杯，加入 50 毫升用户自备的无离子水，充分

混匀

3.

加入到 8cm X 10cm 大小的染色盘

4.

将聚丙烯酰胺凝胶放进染色盘里

5.

室温下，在平式摇荡仪上孵育 30 分钟，速度为 50RPM（注意：如果用户需要暂停，可以过夜，但注

意液体挥发）

6.

小心倒掉染色盘里的 固着液（Reagent A）

7.

加入 100 毫升用户自备的无离子水

8.

室温下，在平式摇荡仪上孵育 10 分钟，速度为 50RPM

9.

小心倒掉染色盘里的无离子水

10. 重复实验步骤 7 至 9 一次

11. 移取 xx 毫升 氧化液（Reagent B）到 2 号烧杯，加入 90 毫升无离子水，充分混匀

12. 加入上述配制的 xx 毫升 2 号烧杯里稀释的 氧化液（Reagent B）到染色盘里

13. 室温下，在平式摇荡仪上孵育 60 分钟，速度为 50RPM

14. 小心倒掉染色盘里的 氧化液（Reagent B）

15. 加入 100 毫升用户自备的无离子水

16. 室温下，在平式摇荡仪上孵育 10 分钟，速度为 50RPM

17. 小心倒掉染色盘里的无离子水

18. 重复实验步骤 15 至 17 二次

19. 移取 xx 毫升 染色液（Reagent C）到 3 号烧杯，加入 90 毫升无离子水，充分混匀

20. 加入上述配制的 xx 毫升 3 号烧杯里稀释的 染色液（Reagent C）到染色盘里

21. 室温下，在平式摇荡仪上孵育 60 分钟，速度为 50RPM，或直至呈现品红色条带为止，严格避免光照

22. 小心倒掉染色盘里的 染色液（Reagent C）

23. 移取 xx 毫升 还原液（Reagent D）到 4 号烧杯，加入 90 毫升无离子水，充分混匀

24. 加入上述配制的 100 毫升 4 号烧杯里稀释的 还原液（Reagent D）到染色盘里

25. 室温下，在平式摇荡仪上孵育 60 分钟，速度为 50RPM，或直至背景清晰

26. 小心倒掉染色盘里的 还原液（Reagent D）

27. 加入 xx 毫升用户自备的无离子水

28. 室温下，在平式摇荡仪上孵育 10 分钟，速度为 50RPM

29. 小心倒掉染色盘里的无离子水

30. 重复实验步骤 27 至 29 一次（注意：条带更加清晰）

31. 移取 xx 毫升 保存液（Reagent E）到 5 号烧杯，加入 90 毫升无离子水，充分混匀

32. 加入上述配制的 xx 毫升 5 号烧杯里稀释的 保存液（Reagent E）到染色盘里

33. 室温下，在平式摇荡仪上孵育 30 分钟，速度为 50RPM，或过夜至次日处理

34. 直至完成所有拍照和分析：呈现紫红色或品红色为糖蛋白阳性条带

注意事项

1． 本产品为 5 次（50 至 75 个样本）操作

2． 操作时，须戴手套

3． 所有操作在室温下和通风柜里进行

4． 试剂具有腐蚀性，注意操作安全

5． 建议蛋白上样量为 30 至 100 微克

26． 染色液（Reagent C）出现沉淀，可以温热、搅拌或过滤后使用

7． 染色液（Reagent C）须密封避光，如果变成红色，则影响染色效果

8． 确保胶体浸泡在试剂液体里

9． 染色时，严格避免光照

10．染色避免过度，肉眼可见深红色即可终止染色

11．染色通常 20 分钟即可显色，如果样本浓度过低，可以增加染色时间至 2 小时

12．胶体如果达到 1.5 毫米厚，可以增加所有试剂处理时间一倍

13．本产品可以用于西方杂交的蛋白印迹膜的糖蛋白染色

14．本公司提供系列糖蛋白分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定显色清晰