细菌呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

  细菌呼吸链复合物II（琥珀酸－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚，通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化，即采用比色法测定样品中酶活性的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种野生、培养或病原性细菌膜蛋白悬液样品的琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景

细菌呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（Succinate-Coenzyme Q Oxidoreductase；Succinate Dehydrogenase；SQR），结构和功能上类同于线粒体复合物II，膜结合型，是细菌需氧呼吸链与三羧酸循环链接的主要元素：含有四个亚体，铁硫中心（Fe-S clusters），辅因子为黄素（flavin）。其最特征性的酶活性是噻吩甲酰三氟丙酮（thenoyltrifluoroacetone；TTFA）敏感的琥珀酸－辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），细菌内电子由供体黄素传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，进行呼吸链传递。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸－辅酶Q还原酶的催化，氧化为富马酸，同时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH2），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm 波长），由此定量测定琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：

产品内容

  缓冲液（Reagent A）         毫升

  反应液（Reagent B）         毫升

  阴性液（Reagent C）           毫升

  底物液（Reagent D）          微升

产品说明书               1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；  反应液（Reagent B）和  底物液（Reagent D），避免光照，有效保证6月

用户自备

比色皿：用于比色的容器

分光光度仪：用于比色分析

培养箱：用于孵育反应物

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；  缓冲液（Reagent A）室温预热；  反应液（Reagent B）和  底物液（Reagent D）注意避光。然后进行下列操作。

一、 测定准备

1． 准备好待测样品（例如细菌膜蛋白样品等），置于冰槽里 

2． 设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零