钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能红色荧光检测试剂盒产品说明书
（中文版）
主要用途
钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能红色荧光检测试剂是一种旨在通过电变色苯乙烯荧光探针，应对膜性囊泡产生电位梯度变化，而产生荧光变化，来分析和观察钠钾离子转运功能，进一步评价P型ATP酶中的Na+-K+ ATP酶功能的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体等细胞钠钾离子转运活性，即P型ATP酶的Na+-K+ ATP酶功能的检测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞膜上的膜整合蛋白（integral membrane protein）参与细胞内外的物质传输、能量产生与转化等生物学过程，构成离子或代谢分子的通道，常见的包括氢离子、钠离子、钾离子等电解质，在能量依赖型或非依赖型的条件下，完成生理代谢的物质交换。膜通道转运功能检测（transport或uptake assay）用于分析转运蛋白（transport protein）和底物（substrate）的功能、筛选通道抑制剂、进而发现药物以及抗药性机制。建立分子构建的载体或宿主模型、分离膜性囊泡（membrane vesicle）包括正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）或内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV），通过标记底物的转运，来定量测定转运活性。钠/钾ATP酶（Na＋/K＋-ATPase；EC3.6.1.3），是五类ATP酶（F、V、A、P和E型）中P型ATP酶（P type ATPase）之一。ATP酶催化三磷酸腺苷分解为二磷酸腺苷和无机磷。这一去磷酸化反应释放出能量，成为细胞生命代谢的能源。ATP酶为跨膜蛋白（transmembrane），帮助传输各种代谢分子进出细胞。P型ATP酶，又称为E1-E2 ATP酶，通常由一条或两条多肽构成，且呈现两种主要的结构构象E1和E2。这类ATP酶存在于细菌和真核细胞膜和细胞器上，其功能在于水解ATP获得能量，跨膜运输各种化学分子（post albers cycle）。P型ATP酶可以分成4种，Ca2+传输性、Na+-K+ /H+-K+传输性、H+传输性和所有细菌型等。其中钠/钾ATP酶，又称为钠钾泵或钠泵（Na+-K+ pump），是一种电致（electrogenic）膜蛋白。细胞排（3分子）钠吸（2分子）钾时，细胞膜两边无电荷流动，并建立细胞内外离子（胞内低钠、胞外高钾）浓度平衡，维持细胞静态膜电位（电化学电位梯度），控制细胞容量，调节pH，调节神经和肌肉兴奋性，以及碳水化合物、氨基酸和维生素的摄入等。钠/钾ATP酶是心脏病的重要药物靶标。通过使用电变色苯乙烯荧光探针RH421，为膜电压敏感性两性离子染料，在钠/钾ATP酶和ATP的存在下，产生电化学电位梯度，使红色荧光发生升高或降低的变化（激发波长580nm，散发波长670nm），以分析转运蛋白P型ATP酶中Na＋/K＋ ATP酶的功能，以及其抑制剂的筛选。
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 微升
反应液（Reagent C） 毫升
补充液（Reagent D） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保证6月
用户自备
恒温水槽或培养箱：用于反应孵育
500微升比色皿：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪：用于荧光定量分析
实验步骤
一、 样品准备
1． 确定测定对象：动物/人体细胞
2． 分离膜性囊泡（注意：建议使用 系列分离试剂盒产品）
3． 准备好待测的分离样品，并测定钠/钾ATP酶活性
4． 置于冰槽里备用
