细胞名称：

SK-NEP-1 人肾母细胞瘤细胞

半贴壁，不规则型细胞 

编号：

352207 产品形式：

2mL 冻存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ；

安全等级：

一级，安全柜或超净台操作

收货须知：收货当天发现异常，请在 24 小时内及时联系客服，逾期视为收货良好；冻存管形式，收货后及时置于-80℃冰箱保存，若 长时间不使用，应过夜转移至液氮保藏；T25 形式，收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h，然后再对细胞进行常规操作。复苏时每 管一次用完不得留存，复苏后传一代，即可正常使用。请严格按照本说明操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。

培养条件：

37℃，5%CO2，CM24-1 培养液。CM5-1 培养液：85%McCoy’s 5a+15%FBS。McCoy’s 5a：MC’5A 培养基，含谷氨酰胺。

复苏步骤：

①新制 100mm 平皿 1 个，含 12mL 上述培养液；②冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待*溶解后尽快移入 安全柜复苏；③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀；④放入（37℃，5%CO2）培养箱中，过夜换液，3-5 天长满。

传代/冻存：

将旧培养液吸除，PBS 清洗两遍后，无需使用胰酶消化，直接加入 12mL（/100mm 皿）培养液，用吸管吹打细胞至*脱 落，轻轻吹打均匀，可分 3~6 皿培养；冻存则将细胞转移至离心管中，(110g，3min)离心，离心完成后用 6mL 冻存液（90%FBS+10%DMSO） 重悬细胞，吹打均匀，分为 6 支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。 

复苏质量记录：

根据复苏要求，对以上细胞株进行复苏，记录结果如下： 

项目 质量标准 复苏记录

复活性： 12h 贴壁，86h 长满 80% 过夜 18h 后观察贴壁，96h 密度达 80% 细胞形态： 半贴壁，不规则型细胞 CM24-1 培养液中，半贴壁，不规则型，有圆形、短梭性 附图： 结论： 复活性好，且细胞形态无异常，合格