当前位置:主页 > 新闻中心 > 冻存ATCC细胞的复苏和培养指南

冻存ATCC细胞的复苏和培养指南

更新时间:2020-07-28 点击次数:1499
  ATCC细胞通常保存在冻存管中用干冰运输,或是在培养瓶中常温运输。但对于中国客户,由于运输时间稍长,都是采用干冰运输的方式。
  在收到冻存细胞后,很重要的一点是迅速解冻使其立即复苏并除去DMSO,然后将它们放置到培养基中。如果做不到上面这点,需将细胞存储在液氮中(-130℃以下)。不要将冻存细胞储存在高于-130℃的温度下,这会使细胞存活率迅速下降。
  冻存ATCC细胞的复苏和培养
  1.先准备好细胞培养皿或细胞培养瓶,及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37℃水浴中预先温热细胞培养基。(请参阅:*注1)
  2.小心取出装有细胞的冻存管,保持管盖拧紧,将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴中并轻微的晃动以帮助解冻。解冻过程应该尽快,大约短于2分钟或待后一块小冰晶体刚融化,就应将细胞冻存管取出水浴。
  3.在从水浴中取出的ATCC细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂,用无菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。
  4. 小心拧开冻存管的顶部,将管内容物用1ml移液枪转移到含9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟(125×g),小心吸去上清液以去除抗冻剂(二甲基亚砜),避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的*培养基中。将细胞悬液转移到培养容器,轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5-8ml培养基并转移到T25培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12-20ml培养基并转移到T75培养瓶。
  5. 将细胞培养容器置于细胞培养箱,在温度37℃, 二氧化碳浓度5%的培养条件下进行孵育。细胞培养24小时后应在显微镜下观察细胞形态和生长状况。(请参阅:*注2)
  *注1:虽然大多数细胞株可以在一种以上的培养基中生长,但细胞的特征有可能会在更换不同种培养基时发生变化。为保证*效果,请从细胞培养一开始就使用ATCC推荐的培养基。
  *注2:某些细胞株,如杂交瘤株,可能需要几天的时间才从冻存状态下*恢复正常生长。在细胞复苏培养di一天可能会呈现较低的细胞活力并产生一些细胞碎片。度过这一时期后,细胞会恢复并进入指数增长期。
  为了确保ATCC细胞活力、遗传基因型稳定和表型的稳定,细胞株的培养需要保持在对数期。这意味着需要定期对细胞进行传代。并且注意在细胞进入生长平台期之前,即单层细胞100%汇合长满前或悬浮细胞达到其推荐的大细胞密度之前,要进行细胞传代。监测细胞生长和绘制每个细胞株的生长曲线都有助于确定细胞株的生长特性。

版权所有 © 2024 上海铭博生物科技有限公司 备案号:沪ICP备15037298号-1 技术支持:化工仪器网 管理登陆 sitemap.xml

点击咨询 联系方式 二维码

服务热线

021-55825868

扫一扫,关注我们