MB80042.2 v.A
冰冻切片组织琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
冰冻切片组织琥珀酸脱氢酶（SDH）活性染色试剂是一种旨在使用合成电子受体四氮唑兰染料，通过反应系统的作用，组织样本中酶活性部位呈现出蓝黑色沉淀现象的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种动物组织冰冻切片样品琥珀酸脱氢酶的活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，显色清晰。
技术背景
琥珀酸脱氢酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，产生不溶性蓝色或蓝黑色甲暨色素。据此证明组织细胞琥珀酸脱氢酶的活性。
产品内容
清理液（Reagent A） 100毫升
染色液（Reagent B） 10毫升
反应液（Reagent C） 1毫升
固着液（Reagent D） 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 染色液（Reagent B）和 反应液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
培养箱：用于反应孵育
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
染色开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化；移取900微升 染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入100微升 反应液（Reagent C），混匀后，标记为 染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后进行下列操作。
- 取出待测的10微米厚的冰冻组织切片
- 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面
- 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
- 小心加上200微升 染色工作液，铺满整个切片样品表面
- 放进37℃培养箱里孵育10分钟，避免光照
- 小心移去切片上的 染色工作液
- 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
- 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤7至8二次
- 小心加上200微升 固着液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面
- 室温下孵育15分钟
- 小心移去切片上的 固着液（Reagent D）
- 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
- 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤13至14二次
- 放上盖玻片或封片（中性树脂）
- 即刻在光学显微镜下观察和计数：表达琥珀酸脱氢酶活性的组织细胞为阳性组织细胞，呈现蓝黑色。
注意事项
- 本产品为50次操作
- 操作时，须戴手套
- 反应液（Reagent C）避免反复冻融
- 阴性对照时，GENMEN染色工作液不含有 反应液（Reagent C）
- 可以使用50毫摩尔丙二酸钠（Sodium malonate）作为抑制剂
- 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
- 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
- 整个操作，在避光状态下进行
- 染色孵育时间，根据样品和酶活性强弱调整，通常为5至30分钟
- 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
- 样品染色后保存，避免光照
- 本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品
质量标准
