植物黄烷酮-3-羟化酶（Flavanone-3-hydroxylase；F3H）活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
植物黄烷酮-3-羟化酶（Flavanone-3-hydroxylase；F3H）活性酶连续反应光度法定量检测试剂是一种旨在使用黄烷酮-3-羟化酶、琥珀酸辅酶A合成酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应， 即采用光度法测定其氧化后峰值（NADH浓度）的变化，以此进行测算单位酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等黄烷酮-3-羟化酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
黄烷酮-3-羟化酶（Flavanone-3-hydroxylase；F3H；EC1.14.11.9），又称为黄烷酮-3-双加氧酶（Flavanone- 3-dioxygenase），全称为黄烷酮-2-酮戊二酸：氧分子氧化还原酶（3-羟基化）（flavanone-2-oxoglutarate:oxygen oxidoreductase (3-hydroxylating)），属于氧化还原酶家族中一员，为可溶性非亚铁血红素性含铁2–酮戊二酸依赖性双加氧酶（2-oxo-glutarate dependent dioxygenase；2-ODD），单体蛋白，催化黄烷酮，例如2S柚皮素（2S naringenin）的立体选择性羟基化反应（stereospecific hydroxylation）为2R,3R二氢黄酮醇类（dihydroflavonol），例如2R,3R二氢山柰酚（2R,3R dihydrokaempferol；DHK），是生物合成黄酮类、花青素（anthocyanidins）、儿茶素（catechins）等化合物的关键步骤，，从而调节类黄酮通路。基于底物柚皮素受到黄烷酮-3-羟化酶的催化，获得氧化，同时分解2-酮戊二酸，产生二氢山柰酚和琥珀酸，进而通过琥珀酸辅酶A合成酶（Succinyl CoA synthetase）、丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），所产生的峰值变化（340nm），来定量分析黄烷酮-3-羟化酶的活性。其反应系统为：
Flavanone-3-hydroxylase
Naringenin + 2-oxoglutarate + O2 → dihydrokaempterol + succinate + CO2
Succinyl CoA synthetase
Succinate + CoA + ATP → Succinyl CoA + Pi + ADP
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
（高吸收峰） （低吸收峰）
产品内容
清理液（Reagent A） 60毫升
裂解液（Reagent B） 20毫升
缓冲液（Reagent C） 20毫升
酶促液（Reagent D） 400微升
反应液（Reagent E） 2毫升
底物液（Reagent F） 2毫升
阴性液（Reagent G） 1毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融； 底物液（Reagent F），避免光照，有效保证6月
