细菌丙酮酸激酶总活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

 细菌丙酮酸激酶总活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的酶偶联反应系统中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用光度法来测定细菌裂解萃取样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细菌细胞裂解萃取悬液样品丙酮酸激酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase；PK；EC2.7.1.40），全称为ATP-丙酮酸磷酸转移酶（ATP:pyruvate phosphotransferase），是细胞代谢的调节酶，催化细胞糖酵解的zui后反应：将磷酸烯醇丙酮酸（phosphoenol pyruvate；PEP）转化成丙酮酸（pyruvate），同时产生ATP。丙酮酸激酶在糖酵解中活性增高，而在葡糖生成过程中活性降低。细菌丙酮酸激酶为同源四聚体（homotetramer），240Kd分子量，分成两种类型：一种是诱导型（inducible），由果糖-2,6-二磷酸（Fructose-2,6-bisphosphate；F2,6BP）激活；一种是结构型（constitutive），由AMP激活。基于磷酸烯醇丙酮酸转化成丙酮酸后，通过乳酸脱氢酶系统，测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）的峰值变化（340nm 波长），来定量分析丙酮酸激酶的活性。丙酮酸激酶反应系统为：

产品内容

 清理液（Reagent A）  毫升

 裂解液（Reagent B）  毫升

 缓冲液（Reagent C）  毫升

 反应液（Reagent D）  毫升

 底物液（Reagent E）    毫升

 阴性液（Reagent F）    微升

产品说明书      1份

保存方式

保存 裂解液（Reagent B）、 反应液（Reagent D）和 底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器

15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

超声仪：用于细菌裂解

（微型）台式离心机：用于样品操作

比色皿或96孔板：用于光度分析的容器

分光光度仪或酶标仪：用于光度分析