动物组织氧化应激活性氧鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒产品说明书
（中文版）
主要用途
动物组织氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下，植物样品中的活性氧族使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测样品中活性氧族（过氧化氢）的生成和数量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物和人体组织的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。鲁米诺（luminol），又称氨基邻苯二甲酰肼（luminol;3-aminophthalic hydrazide 5-amino-2,3-dihvdro- 1,4-phthalazinedione），是一种脂溶性的发光剂，氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光，具有460nm左右峰值的带状光谱，肉眼可观察到鲜明的紫蓝色。鲁米诺以单价氧化形式与超氧自由基阴离子反应，产生不稳定性内过氧化物或二氧环丁烷（Dioxetane），由此分解成电激发状态，通过释放光子，回复到基态。鲁米诺作为探针，可以检测植物中过氧化氢、超氧自由基阴离子和羟自由基，其中过氧化氢zui强，其发光强度与过氧化氢水平成正相关。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
强化液（Reagent B） 毫升
发光液（Reagent C） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 强化液（Reagent B）和 发光液（Reagent C）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
微型台式离心机：用于去除样品杂质
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织样品
超声仪：用于裂解组织样品
测试管：用于发光检测用的试管
化学发光仪：用于检测化学发光
实验步骤
- 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量
- （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管（200毫克组织）
- （选择步骤）加入xx毫升 清理液（Reagent A）
- （选择步骤）小心抽去 清理液（Reagent A）
- 放进一个15毫升锥形离心管
- 加入置于冰槽里的xx毫升 清理液（Reagent A）
- 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
- 在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）
- 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
- 强力涡旋震荡5秒，充分混匀
- （选择步骤）在冰槽里，置于200瓦超声仪下，功率50％，猝击5秒
- 转移到预冷的1.5毫升离心管
- 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为3000g（或6000RPM，例如eppendorf 5415）
- 小心移取1毫升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
- （选择步骤）移取5微升进行蛋白定量测定，并调整蛋白浓度为20毫克/毫升（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
- 置于冰槽里继续后续操作（1小时内）
