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细胞基质金属蛋白酶12活性荧光定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
时间:2023/10/10 点击次数:954

细胞基质金属蛋白酶12活性荧光定量检测试剂盒产品说明书(中文版)

 

主要用途

 

 细胞基质金属蛋白酶12MMP-12)活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针5-羧基荧光素供体和QXL受体标记的多肽底物RPKPVENvaWRK,在蛋白酶的水解下,解离抑制基团,产生荧光产物,即采用荧光法来测定样品中酶活性*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的其适用于各种细胞裂解萃取液样品(动物、人体)、部分或*纯化酶样品中基质金属蛋白酶12的定量检测,以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,安全可靠。

 

技术背景

 

基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinasesMMPs是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称,因含有金属(锌、钙)离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种,几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质(extracellular matrix)成分,同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、组织再吸收(tissue resorption)、疾病发生,例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类:(1)胶原酶:MMP1MMP8MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖;(2)明胶酶(Ⅳ型胶原酶):MMP2MMP9,又称明胶酶AB,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维;(3)基质溶解素:MMP3MMP7MMP16MMP11MMP12,主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1MMP8MMP9;(4)膜型金属蛋白酶:MT1-MMPMT2-MMPMT3-MMP,主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs,当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成,合成的MMPs以无活性的酶原(proenzyme)形式分泌到细胞外,随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活,一种激活的MMPs可激活另一种MMPs,形成瀑布效应。基质金属蛋白酶12MMP12),又称为巨噬细胞弹力蛋白酶(macrophage elastase),其目标蛋白是弹性蛋白elastin)、纤维连接蛋白fibronectin)、层粘蛋白laminin)、纤维蛋白溶酶原plasminogen)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体u-PAR)和组织因子通路抑制剂(tissue factor pathway inhibitor)。MMP12与吸烟型肺气肿smoke-induced emphysema)、肿瘤和其它疾病等发生有关。MMP12酶原型为54kD,而活化型为45kD22kD基质金属蛋白酶12的活性检测通过荧光共振能量转移法(Fluorescence resonance energy transferFRET),即传递激发状态的能量由处于较短波长的供体(donor到覆盖供体波长的受体(acceptor),使得距离依赖性反应的供体的散发光子淬灭(quench)。基于多肽底物RPKPVENvaWRK两端标记的供体荧光探针5-羧基荧光素5-carboxyfluorescein5-FAM)受到另一个受体基团QXL的抑制而荧光淬灭(quench)。一旦多肽受到MMP12水解,释放出具有强烈荧光的5-羧基荧光素多肽片段,据此根据其荧光强度(激发波长490nm,散发波长520nm)的变化,来定量测定基质金属蛋白酶12的活性。基质金属蛋白酶12反应系统为:

MMP12

5-FAM-RPKPVE-Nva-WRK-QXL-NH2   →    5-FAM-RPKP  +  VE-Nva-WRK-QXL-NH2 

 



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