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浅析ATCC细胞的孢子分离法

时间:2021-04-22 点击次数:329
  ATCC细胞孢子分离法又可分为以下几种方法:
  (1)褶上涂抹法:选取新鲜、健壮、未开伞、未破裂的子实体,洗净后用0.1%升Hg或75%酒精表面灭菌2分钟,然后连同培养基一起放入接种箱内,经福尔马林熏蒸消毒12~24小时,ATCC细胞再按无菌操作技术将接种环在子实体菌褶上涂抹,把涂抹后带孢子的接种环在培养基上划线接种,,zui后置于25~28℃恒温箱内培养,可得纯菌种。
  (2)孢子印采集法:取灭过菌的载玻片、试纸或黑布,置于新鲜、未开伞或未开裂的子体菌褶的下方。经24小时后,便落下孢子,形成印痕(即孢子印)。然后,用接种环或玻璃棒蘸取孢子,接种在平面或斜面培养基上,进行恒温培养,可得纯菌种。ATCC细胞
  (3)孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃钟罩、培养皿、三角架、搪瓷盘等组成。钟罩下为一搪瓷盘,直径25厘米左右,盘内先垫衬4~6层纱布,中央放1副9厘米直径的培养皿,大盖口朝下,上放小的,口向上。然后,在上面小的培养皿上放1只铅丝绕成的三角架,再将带孔的玻璃钟罩盖上,顶上罩孔用棉塞塞好,zui后,用纱布包好整个孢子收集器,置于高压灭菌锅或蒸笼内灭菌2小时。
  孢子收集器灭菌消毒后,放入无菌室或无菌箱内。然后,用小刀割取1块4~5厘米大小的子实体,插在收集器内的三角架顶上(若无孢子收集器,也可用培养皿代替)。再置于温度24~26℃下培养24小时,培养皿中便可见到白色粉状物,此即为孢子。此时,可将孢子收集器再移至接种箱内,取出培养皿,盖好,并在培养皿内加入10~20毫升的无菌水,使孢子散于本中,成为孢子悬浮液。然后,再用无菌打针筒或吸管吸取孢子悬浮液,接种于试管斜面培养基上,每管注2~3滴。置于24~26℃温度下培养5~7天,培养基上便可长出白色菌落。待菌落直径有0.5厘米时,选健壮的菌落,再移接于另一试管的斜面培养基上培养。ATCC细胞当白色菌丝长满试管时,便得纯菌种。

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