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Elisa试剂盒在实验时的哪些误差该如何避免?

时间:2021-11-20 点击次数:384
  我们平时在Elisa试剂盒实验的时候总是会出现一些误差,那么在Elisa试剂盒实验前我们该如何避免这些误区呢?在Elisa试剂盒实验前我们又有哪些需要注意事项呢?
  1、仔细阅读说明书;
  2、确定试剂盒在有效期内;
  3、按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积);
  4、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存;
  5、准备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等;
  6、根据检测标本数量确定所需试剂的量;
  7、按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂。
  Elisa试剂盒试验时,我们需要注意事项如下:
  1.正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
  2.在Elisa试剂盒实验中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
  (1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
  (2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的浓度需进行滴定:Elisa试剂盒即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

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